尊龙凯时推出的猪伪狂犬病毒gE蛋白阻断ELISA抗体检测试剂盒，旨在提供精准、有效的检测服务。该项工具适用于检测猪血清中抗伪狂犬病毒gE蛋白的抗体，帮助区分临床野毒感染猪和已用gE基因缺失疫苗免疫的猪。伪狂犬病，又称奥耶斯基氏病，由伪狂犬病毒（Pseudorabies Virus，PRV）引起，是一种以发热、奇痒、呼吸道和神经系统疾病为特征的急性传染病，涉及家畜和多种野生动物。

包装规格

本试剂盒提供多种包装规格：96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒。

试剂盒组成

试剂盒包含以下组件：

• 酶标记物：红盖（1ml×1、2ml×2、6ml×2）
• 样品稀释液：黄盖（25ml×1、50ml×1、125ml×1）
• 浓缩洗涤液：白盖（40ml×1、40ml×1、200ml×1）
• 底物显色液：黑盖（10ml×1、10ml×2、25ml×2）
• 终止液：黄盖（5ml×1、10ml×1、25ml×1）
• 阳性对照：绿盖（10ml×1、15ml×1、20ml×1）
• 阴性对照：绿盖（10ml×1、15ml×1、20ml×1）
• 酶标板：96T×1、96T×2、96T×5
• 说明书：1份
• 稀释板：1份

储存和有效期

试剂盒应在2～8℃条件下储存，有效期为12个月。开封后的包被板需在2～8℃避光保存，并防止受潮，使用期限为2个月。

适用仪器

本试剂盒需与含630nm波长的酶标仪、37℃恒温设备和可调微量移液器搭配使用。

样品准备

1. 收集动物全血，使用4000r/min离心10分钟以获取血清，或自然析出血清后收集。确保血清无溶血。
2. 将待检血清与样品稀释液按1:1比例稀释（例如100μl血清与100μl样品稀释液混匀），阴阳性对照无需稀释。
3. 使用前，将浓缩洗涤液恢复至室温并稀释20倍（例如19份蒸馏水加1份浓缩洗涤液），如有结晶需加热溶解。
尊龙凯时推荐使用血清稀释板先完成所有待检血清的稀释，再将稀释后的血清转移至抗原包被板上，以确保反应时间一致。

检验方法

1. 使用前将试剂盒在室温恢复30分钟。
2. 取所需数量的酶标板条，设定阴性、阳性对照各2孔，未使用的板条应密封保存于2～8℃。
3. 向阴阳性对照孔分别加入100μl的对照液，样品孔中加入100μl稀释后的样品。
4. 混匀后盖好盖板膜，在37℃（建议水浴）避光反应1小时。
5. 甩去孔内液体，加入300μl工作洗涤液，重复洗涤5次，最后一次拍干。
6. 向每孔加入100μl酶标记物，盖好盖板膜，在37℃避光反应20分钟。
7. 洗涤，步骤同5。
8. 每孔加入100μl底物显色液，在室温(20～25℃)避光反应10分钟。
9. 每孔加入50μl终止液，混匀后在10分钟内于630nm测定各孔的吸光值。

参考值

在正常实验条件下，阴性对照的平均OD值（ODNC）应≥0.6，阳性对照的平均OD值（ODPC）应≤0.5。

结果判定

1. 设样品孔 OD630nm 值为 S，阴性对照 OD630nm 平均值为 N。
    若 S/N ≤ 0.6，判定为阳性；若 0.6 < S/N ≤ 0.7，判定为可疑；若 S/N > 0.7，判为阴性。
2. 阳性结果指示该猪可能存在野毒感染或使用了非gE基因缺失疫苗。

实验局限性

本检测结果仅作筛查之用，不能作为确诊依据。

注意事项

1. 实验时需佩戴手套及防护服，确保严格遵循消毒隔离制度，所有实验废物按传染物处理。
2. 终止液具有腐蚀性，避免与皮肤和衣物接触，若不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3. 如果阴阳性对照或酶标记物出现少量悬浮物，属正常现象。
4. 酶标板从冷藏取出后应在室温下恢复再开袋，未用完的酶标板应保存在有干燥剂的密封袋中。
5. 浓缩洗涤液在低温下容易结晶，使用前需恢复至室温以确保完全溶解。
6. 洗涤时每孔需添加足够液体以防止孔口遗留游离酶。
7. 检测样品需保持新鲜。
8. 检测结果应以酶标仪读数为准。
9. 不同批号的试剂组分不得混用。