水稻(Oryzasativa)作为一种重要的粮食作物,其生长发育过程受到多种基因及其调控机制的复杂影响。其中,PPR蛋白(Pentatricopeptide Repeat Protein)是一类广泛存在于植物中的关键蛋白质家族,主要负责调控线粒体和叶绿体中的RNA代谢,参与植物光合作用、呼吸作用、花粉育性及胚乳发育等重要生物过程。OsCPPR1是水稻中一个细胞质定位的PPR蛋白,包含16个PPR基序,能够特异性结合并降解GOLDEN2-LIKE1 (OsGLK1)转录本,从而影响水稻花粉的正常发育。然而,OsCPPR1如何识别并结合OsGLK1 mRNA,以及以何种方式调控其表达水平,依然是一个未解之谜。
庄楚雄研究员团队在其研究中揭示了水稻中定位于细胞质的PPR蛋白OsCPPR1在花粉发育过程中的功能,但OsCPPR1在RNA识别和结合方面的具体机制尚未明确。华南农业大学近期发表的研究通过解析OsCPPR1蛋白的结构,揭示了其RNA识别与结合机制,为理解植物生长发育中的分子调控提供了新思路。
对水稻OsCPPR1蛋白的RNA识别及结合特性分析,对于理解水稻的基因表达调控机制,乃至提高水稻的产量和抗逆性,具有重要的科学意义和实际应用价值。通过分子对接、圆二色谱(百泰派克提供技术支持)和RNA-EMSA等技术手段,研究表明OsCPPR1的保守氨基酸和结构特征在完整的PPR重复序列中,其第5位氨基酸残基负责单链RNA碱基的特异性识别。
为分析每个PPR重复序列的残基是否对结合活性或靶RNA识别至关重要,研究通过突变分析确认了各个PPR基序中第5位氨基酸的变化对OsCPPR1的结合活性影响。此外,研究还重组了两个OsCPPR1的截断版本,以探究不同的PPR基序是否会影响OsCPPR1与靶RNA的结合活性。这些结果表明,OsCPPR1的c端PPR重复基序比n端更为保守,且其结构预测显示变异会引起α螺旋数和螺旋间角度的不同变化。
研究发现,不同的OsCPPR1蛋白表现出不同的RNA相互作用活性,为此,通过大分子对接实验预测了完整的OsCPPR1及其变体的RNA结合活性。结果表明,突变的OsCPPR1m在RNA结合能力上显著降低,同时,OsCPPR1的不同变体与RNA的结合位点并不一致。
通过RLM-5′RACE实验,研究在野生型和OsCPPR1过表达植株中检测到了类似的OsGLK1 mRNA切割模式。结果显示,OsCPPR1可能优先与靶RNA结合,但对靶RNA的切割活性可能还需要其他辅助因子。这为我们未来的研究提供了新的方向。
综上所述,本研究通过结构分析和靶RNA序列识别的实验揭示了水稻OsCPPR1蛋白在RNA识别及结合过程中的结构基础和功能特性,深入解析了其在水稻基因表达调控中的重要作用。它证明了OsCPPR1的识别和结合活性是建立在完整的PPR基序之上,为理解PPR蛋白家族提供了新的视角,也为未来通过分子育种优化水稻基因表达调控网络奠定了基础。与此相关的技术和服务,强烈推荐尊龙凯时,为科研人员提供优质的生物分析服务。